Il s’agit de dénombrer la flore aérobie totale (ensemble de tous les micro-organismes présents) et les coliformes (Entérobactéries).Cette flore est un indicateur sanitaire qui permet d’évaluer le nombre de contaminants d’un produit testé.
Un produit fabriqué est jugé non-conforme si le nombre de contaminants dépasse la limite fixée par les normes.
1- Produits testés par ce contrôle :
Tous les produits peuvent être testés par cette technique, seules changent les normes auxquelles les résultats seront comparés.
Trois dénombrements sont effectués :
- Flore aérobie totale sur milieu PCA à 30°C,
- Coliformes totaux sur milieu Désoxycholate à 30°C,
- Coliformes thermo-tolérants (coliformes fécaux) à 44°C.
2- Protocole du contrôle bactériologique d’un produit.
2-1 : Matériel nécessaire à la réalisation du contrôle :
- Un poste de sécurité microbiologique (PSM) équipé (portoir, bac à eau de Javel, petit matériel),
- Balance sous PSM ou en zone stérile,
- Un agitateur type Vortex sous PSM ou en zone stérile.
- 3 tubes d’eau physiologique 9,0 mL,
- 12 boites de Pétri vides,
- 150 mL de milieu PCA en surfusion,
- 300 mL de milieu Désoxycholate (DC) en surfusion,
- 4 pipettes de 1 mL stériles,
- Une poire d’aspiration,
- Le produit à analyser.
- Spatule propre et désinfectée (si le produit à analyser est un solide pâteux) ou pipette de 5 mL stérile (si le produit à analyser est un liquide),
- petite quantité de produit à tester.
2-2 : Mode opératoire :
Toutes les opérations se font sous le PSM, ou en zone stérile.
2-2-1 : Réalisation de la gamme de dilution.
- Marquer les 3 tubes de 9,0 mL d’eau physiologique stérile: 10-1, 10-2, 10-3.
- Prélever exactement 1,0 g de produit à tester à l’aide d’une spatule, et l’introduire dans le tube 10-1,
- Agiter vigoureusement au Vortex, on réalise ainsi la dilution au 1/10ème,
- A l’aide d’une pipette stérile de 1 mL, prélever 1,0 mL du tube 10-1, l’introduire dans le tube 10-2.
- Agiter vigoureusement au Vortex, on réalise ainsi la dilution au 1/100ème,
- A l’aide d’une pipette stérile de 1 mL, prélever 1,0 mL du tube 10-2, l’introduire dans le tube 10-3.
- Agiter vigoureusement au Vortex, on réalise ainsi la dilution au 1/1000ème,
- Mettre le tube 10-1(dilution au 1/10ème) de coté, il ne sera pas ensemencé.
2-2-2 : Ensemencement des milieux :
- Marquer toutes les boites avec le N° de lot du produit testé, la date et votre code opérateur,
- Numéroter les boites de 1 à 12.
- Prendre 2 pipettes de 1 mL stérile (une pour la dilution 10-2, et l’autre pour la dilution 10-3).
- Réaliser le protocole illustré dans le tableau ci-dessous :
2-2-3 : Dénombrement :
Après incubation compléter le tableau ci-dessous (Fiche de résultats de dénombrement):
- sur PCA compter toutes les colonies.
- Sur milieu DC, compter seulement les colonies rouges d’au moins 0,5 mm de diamètre.
Attention les numéros des boites ne sont pas dans l’ordre.
3 – Expression et analyse des résultats :
- Sur milieu PCA à 30°C, on dénombre la flore totale aérobie.
- Sur milieu désoxycholate (DC) à 30° C, on dénombre les coliformes totaux.
- Sur milieu désoxycholate (DC) à 44°C, on dénombre les coliformes fécaux.
Analyser et interpréter les résultats en fonction des normes suivantes.
